紫外可見分光光度計(jì)的原理是利用物質(zhì)的分子或離子對(duì)某一波長范圍的光的吸收作用，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性分析，定量分析及結(jié)構(gòu)分析，所依據(jù)的光譜是分子或離子吸收入射光中的特定波長的光而產(chǎn)生的吸收光譜。根據(jù)所吸收光的波長區(qū)不同，分為紫外分光光度法和可見光光度法，合稱為紫外可見分光光度法。

 紫外可見分光光度法是研究物質(zhì)在紫外可見光波下的分子吸收光譜的分析方法，在光的性質(zhì)中200-400nm波長的光叫做紫外（UV），從400-800nm叫做可見（VIS），從800nm到近1毫米是紅外（IR）。僅可見光才能被我們的眼睛看見，而包含所有波長的光，包括紫外，可見光和紅外叫做白光（例如太陽光），太陽光發(fā)出的白光可以通過棱鏡濾光片等分成七種類似彩虹的顏色，白光即包含所有波長的光，單色光即單波長的光。

根據(jù)朗伯比爾定律：A＝kbc表明：一定溫度下，一定波長的單色光通過均勻的、非散射的溶液時(shí)，溶液的吸光度與溶液的濃度和液層厚度的乘積成正比。

A＝kbc式中:

A：吸光度；描述溶液對(duì)光的吸收程度；

k：摩爾吸光系數(shù)，單位L·mol－１·cm－１；

b：液層厚度(光程長度)，通常以cm為單位；

c：溶液的摩爾濃度，單位mol·L－１；

我們可以舉個(gè)小例子來說明一下，有甲乙兩個(gè)相同材質(zhì)的玻璃杯，其中甲裝有潔凈的水而乙裝的是渾濁的水把它們放在靠窗的地方，這時(shí)甲可以透過大部分的光，而乙則沒有那么多光透過，在這里透過的光的比率稱為透射比，透射比通常以百分比形式來表示（%T）相反的從窗口透過的的光被吸收比率*叫做吸收率（Abs）。

物質(zhì)對(duì)光的吸收是選擇性的，利用被測物質(zhì)對(duì)某波長的光的吸收來了解物質(zhì)的特性，通過測定被測物質(zhì)對(duì)不同光的吸收強(qiáng)度，以波長為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)即可得出該物質(zhì)在測定波長范圍的吸收曲線。在吸收曲線中，通常選用*大吸收波長進(jìn)行物質(zhì)含量的測定。例如蘋果是紅色的，為什么蘋果看上去是紅色的而不是別的顏色？*好比我們對(duì)某種顏色喜歡一樣，物質(zhì)對(duì)顏色也有偏好，當(dāng)某種物質(zhì)暴漏包含各種顏色的光中時(shí)，它吸收并僅保存了光中它*喜歡的顏色，它不喜歡的顏色被反射，這*形成了我們眼中看到的某種物質(zhì)的顏色。

根據(jù)這一特性我們即可通過顏色密度來對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量分析以此來測定某種物質(zhì)（溶液）的含量，例如我想測自來水里的鐵，通常無法直接采用分光光度法進(jìn)行測量，因此在這種方式測定中需要添加與目標(biāo)物質(zhì)反應(yīng)顯色的著色試劑，里面含鐵越多則顏色*越深（高吸光度）少則相反。這時(shí)我們需要配置標(biāo)準(zhǔn)溶液的校正曲線，從低到高來測量標(biāo)準(zhǔn)濃度的吸光值獲得該測量的校正曲線。在定量分析中還要考慮物質(zhì)的吸收波長，通過觀察測量已經(jīng)著色的吸收光譜來選擇吸收*大而相對(duì)平滑的波長（現(xiàn)在多數(shù)儀器已能自動(dòng)測量物質(zhì)的*佳吸光率如HACH的DR3900）。

實(shí)際測量時(shí)光譜與測定條件也有密切的關(guān)系，測定條件如溫度，溶劑極性等不同，吸收光譜的形狀、吸收峰的位置、吸收強(qiáng)度等都可能發(fā)生變化。對(duì)于溶劑的選擇要注意盡量選用低極性溶劑同時(shí)能很好的溶解被測物，并形成溶液具有良好的化學(xué)性質(zhì)和光化學(xué)的穩(wěn)定性，溶劑在樣品的吸收光譜區(qū)無明顯的吸收并注意保證實(shí)踐條件的一致性，這樣既能保證*小誤差又可達(dá)到*佳的測量結(jié)果。